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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的血清如何挑選
  • 更新日期:2024-08-05      瀏覽次數(shù):73
    • 一、什么是血清

      血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其中牛血清是重要的細(xì)胞培養(yǎng)添加成分,具有終止胰蛋白酶消化,提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用。

      二、血清的分類與區(qū)別

      根據(jù)采血時(shí)間的不同,牛血清通常分為胎牛血清(FBS)、新生牛血清(NCS)、小牛血清(BCS)、供體血清。

       細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的血清如何挑選

      這四種有什么區(qū)別?

      (1)采血方式不同:胎牛血清是母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí),采用剖腹心臟密閉穿刺取血;而新生牛血清、小牛血清和供體牛血清分別是取自新生牛(小牛)、成牛的血。

      (2)血清成分不同:胎牛血清還未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少;促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分也不同于其他幾類血清。

      (3)用途不同:某些細(xì)胞的培養(yǎng)必須使用胎牛血清才行。如:干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等;而有些細(xì)胞需要小牛血清就可以,如腫瘤細(xì)胞等。使用濃度也不同,一般在10%-15%,有特殊要求的濃度在20%。

      (4)顏色不同:血清根據(jù)血紅蛋白含量的不同,表現(xiàn)的顏色也不一樣。真正的胎牛血清凝血功能差,紅細(xì)胞容易破裂,一般表現(xiàn)出微紅色或橘色;而新生牛(小牛)血清則表現(xiàn)為蠟黃色或偏黃色。

      (5)澄清度和粘稠度不同。胎牛血清中的蛋白和脂類含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而新生牛(小牛)血清相比更加粘稠。

      理論上,優(yōu)質(zhì)的胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清,與新生牛和小牛血清相比,各類生長(zhǎng)因子含量更為豐富。

      但是由于胎牛血清價(jià)格相對(duì)較高,且不同實(shí)驗(yàn)對(duì)于血清的需求也不同,因此要綜合考慮各實(shí)驗(yàn)室、生產(chǎn)企業(yè)的條件與所培養(yǎng)細(xì)胞類型等多方面因素。

      另外,除了以往根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和文獻(xiàn)報(bào)道,必要時(shí)也可進(jìn)行針對(duì)特定細(xì)胞的血清篩選試驗(yàn),以篩選出最佳血清。

      三、血清如何正確保存?

      血清在生產(chǎn)制備完成后,通過(guò)質(zhì)量檢測(cè),然后被運(yùn)送至市場(chǎng)上銷售。整個(gè)過(guò)程中,包括運(yùn)輸流程,儲(chǔ)存溫度應(yīng)嚴(yán)格保證在-20℃,避免反復(fù)凍融影響血清活性。

      另外,實(shí)驗(yàn)人員在收到血清后一定要進(jìn)行檢查,確認(rèn)完好后及時(shí)送至-20℃冰箱中儲(chǔ)存,用時(shí)再取出解凍。如果一次無(wú)法用完一瓶,應(yīng)該無(wú)菌分裝后冷凍保存。注意避免反復(fù)凍融。

      四、血清如何正確解凍使用?

      首先將血清置于冰箱2-8℃中12-24小時(shí),使之緩慢部分溶解,再放到室溫下全溶。

      注意:溶解過(guò)程中要每隔一段時(shí)間緩慢地?fù)u動(dòng)血清使之混勻。切記:避免37℃水浴。

      另外,解凍后的血清,不宜在4℃冰箱中放置過(guò)久。